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        蛹蟲草

           日期:2019-07-06     瀏覽:1049    評論:0    
        核心提示:蛹蟲草為子囊菌門,肉座目,麥角菌科、蟲草屬的模式種。學名為Cordyceps militaris(L.ex Fr.) Link. 蛹蟲草,又叫北冬蟲夏草,北蟲草,簡稱蛹草,一般把活體蟲蛹培養(yǎng)的北蟲草稱為蛹蟲草,兩者是同種真菌,但在營養(yǎng)成分上含量相差較大。 蛹蟲草世界性分布,天然資源數(shù)量很少。1950年,德國科學家Cunningham觀察到被蛹蟲草寄生的昆蟲組織不易腐爛,進而從中分離出一種抗菌性物質(zhì),3'-脫氧腺苷,定名為蟲草素。蛹蟲草,多感染鱗翅目昆蟲的蛹,由子座(即草部分,又稱子實體)與菌核
        蛹蟲草
        蛹蟲草為子囊菌門,肉座目,麥角菌科、蟲草屬的模式種。學名為Cordyceps militaris(L.ex Fr.) link. 蛹蟲草,又叫北冬蟲夏草,北蟲草,簡稱蛹草,一般把活體蟲蛹培養(yǎng)的北蟲草稱為蛹蟲草,兩者是同種真菌,但在營養(yǎng)成分上含量相差較大。
        蛹蟲草世界性分布,天然資源數(shù)量很少。1950年,德國科學家Cunningham觀察到被蛹蟲草寄生的昆蟲組織不易腐爛,進而從中分離出一種抗菌性物質(zhì),3'-脫氧腺苷,定名為蟲草素。蛹蟲草,多感染鱗翅目昆蟲的蛹,由子座(即草部分,又稱子實體)與菌核(即昆蟲的尸體部分)兩部分組成的復合體,簡單來說,就是蟲體與草的結(jié)合。
        中醫(yī)認為,既能補肺陰,又能補腎陽,主治腎虛,陽痿遺精,腰膝酸痛,病后虛弱,久咳虛弱,勞咳痰血,自汗盜汗等,是一種能同時平衡、調(diào)節(jié)陰陽的中藥。

        中文學名:蛹蟲草
        拉丁學名:Cordyceps militaris
        別    稱:北冬蟲夏草,北蟲草,北蛹蟲草
        界:真菌界
        亞    門:子囊菌亞門
        綱:核菌綱
        目:麥角菌目
        科:麥角菌科
        屬:蟲草屬
         
        形態(tài)特征
        概述
        蛹蟲草 - 形態(tài)特征子座單生或數(shù)個一起從寄生蛹體的頭部或節(jié)部長出,顏色為橘黃或橘紅色,全長2-8厘米,蛹體顏色為紫色,長約1.5-2厘米。
        菌絲體
        蛹蟲草是一種子囊菌,通過異宗配合進行有性生殖。其無性型為蛹草擬青霉。其子實體成熟后可形成子囊孢子(繁殖單位),孢子散發(fā)后隨風傳播,孢子落在適宜的蟲體上,便開始萌發(fā)形成菌絲體。菌絲體一面不斷地發(fā)育,一面開始向蟲體內(nèi)蔓延,于是蛹蟲就會被真菌感染,分解蛹體內(nèi)的組織,以蛹體內(nèi)的營養(yǎng)作為其生長發(fā)育的物質(zhì)和能量來源,最后將蛹體內(nèi)部完全分解。
        子實體
        一般當蛹蟲草的菌絲把蛹體內(nèi)的各種組織和器官分解完畢后,菌絲體發(fā)育也進入了一個新的階段。形成橘黃色或橘紅色的頂部略膨大的呈棒狀的子座(子實體)。
        生長環(huán)境
        生長于針、闊葉林或混交林地表土層中鱗翅目昆蟲的蛹體上。
        分布范圍
        分布于云南(昆明、安寧、江川)、吉林(安圖、永吉)、遼寧(沈陽)、內(nèi)蒙古(哲里木盟)。
        主要價值
        醫(yī)用價值
        天然野生北冬蟲夏草始載于《新華本草綱要》,其“味甘,性平”,有“益肺腎、補精髓,止血化痰”的功效。現(xiàn)代中醫(yī)學巨著《中華藥海》記載:“蛹草,別名北冬蟲夏草(吉林),性味甘、平,入肺、腎二經(jīng)。功效主治:1.益腎補陽,本品甘平,補腎陽,益精髓,用治腎陽不足,髓海空虛,眩暈耳鳴,健忘不寐,腰膝酸軟,陽痿早泄等癥。2.止血化痰,本品即補腎陽,有益肺陰,保肺益腎,秘經(jīng)益氣,對肺腎不足、久咳虛喘、勞嗽痰血者有較好療效”。此外《全國中草藥匯編》記載:“蛹蟲草(北蟲草)的子實體及蟲體也可作為冬蟲夏草入藥”. 
        功效
        ⒈增強人體免疫功能及抗癌作用。
        ⒉抗菌作用。
        ⒊對肺虛咳嗽、急慢性支氣管炎、哮喘等有較好療效。
        ⒋有抗疲勞、耐缺氧、抗衰老的作用。
        5.抗驚厥及鎮(zhèn)靜作用。
        6.有雄性激素樣作用。
        7.對心腦血管系統(tǒng)的作用。
        栽培技術(shù)
        營養(yǎng)
        碳源:蛹蟲草合成碳水化合物和氨基酸的基礎(chǔ),也是重要的能量來源。人工栽培時,蛹蟲草可利用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、淀粉、果膠等,其中尤以葡萄糖、蔗糖等小分子糖類的利用效果最好。
        氮源:氮元素是蛹蟲草自身合成的蛋白質(zhì)、核酸等有機氮以及銨鹽等無機氮。能利用的有機氮很多,如氨基酸、蛋白胨、豆餅粉、蠶蛹粉等;無機氮主要有氯化銨、硝酸鈉、磷酸氫二銨等。有機氮的利用效果最好。
        礦質(zhì)元素:以磷、鉀、鈣、鎂等為主要元素。一般通過添加無機鹽類來滿足蛹蟲草對礦質(zhì)元素的需求。
        維生素:蟲草菌絲不能合成必要的維生素,適當加入VB1有利于菌絲的生長發(fā)育。
        溫度
        在蟲草的不同生長發(fā)育階段都有最適溫度、最低溫度和最高溫度的界限。菌絲生長溫度6℃-30℃,低于6℃極少生長,高于30℃停止生長,甚至死亡。最適生長溫度為18℃-22℃;子實體生長溫度為10℃-25℃,最適生產(chǎn)溫度為20℃-23℃。原基分化時需較大溫差刺激,一般應保持5℃-10℃溫差。
        水分和濕度
        水分是蛹蟲草菌體細胞的重要組成部分。菌絲生長階段,培養(yǎng)基含水量保持在60%-65%,空氣相對濕度保持在60%-70%;子實體生長階段,培養(yǎng)基含水量要達到65%-70%,空氣相對濕度保持在80%-90%。要注意培養(yǎng)基適時補水和補充營養(yǎng)液。
        空氣
        蛹蟲草需要少量空氣。但在子實體發(fā)生期要適當通風,增加新鮮空氣。否則,二氧化碳積累過多,子座不能正常分化,影響生長發(fā)育。
        光照
        孢子萌發(fā)和菌絲生長階段不需要光照,應保持黑暗環(huán)境。但轉(zhuǎn)化到生殖生長階段需要明亮的散射光,光照度為100-240勒(勒為光照度單位)。光照強,菌絲色澤深,質(zhì)量好,產(chǎn)量高。
        酸堿度
        蛹蟲草
        蛹蟲草為偏酸性真菌,其菌絲生長發(fā)育最適pH為5.2-6.8。但在滅菌和培養(yǎng)過程中pH值要下降。所以在配制培養(yǎng)基時,應調(diào)高pH值1-1.5,在配制培養(yǎng)基時可加0.1%-0.2%的磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀等緩沖物質(zhì)。
        育種
        長期采用無性繁殖及多次轉(zhuǎn)管的蛹蟲草菌種,其母本基因容易變異,表現(xiàn)為出草畸形,產(chǎn)質(zhì)量下降。因此,在生產(chǎn)中應定期對蛹蟲草菌種進行一次有性繁殖。具體做法是,選取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、早熟的蛹蟲草子實體,用0.1%升汞溶液,或75%的酒精進行表面消毒后,用無菌水清洗表面藥液,置于盛有綜合培養(yǎng)基容器上方懸空,在21℃-23℃下靜置培養(yǎng),待培養(yǎng)基表面出現(xiàn)星芒狀蟲草菌落時,在接種箱內(nèi)挑取單個或多個菌落置試管斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)。待蛹蟲草菌絲布滿斜面后再提純。獲得的孢子母種須經(jīng)出草比較試驗后,選取優(yōu)質(zhì)蟲草子實體再進行一次組織分離,經(jīng)篩選后方可用于轉(zhuǎn)擴栽培種。
        考種
        將母種擴大培養(yǎng)后,置米飯培養(yǎng)基上,于18℃-20℃下培養(yǎng)20-30d,觀察生長情況。若見有細菌或霉菌污染,應對母種進一步純化;若無雜菌污染,可繼續(xù)培養(yǎng),一個月后即有橙紅色子實體產(chǎn)生,說明母種可靠。
        二級種子培養(yǎng)
        將液體培養(yǎng)基分裝于500ml三角瓶中,每瓶加培養(yǎng)液200ml,用12層紗布外加一層牛皮紙封口。13-30分鐘滅菌后,將母種在無菌條件下用接種鉤接入三角瓶中,每支斜面可接10瓶以上。接種后于20℃搖床培養(yǎng)5d左右,待形成均勻小球后即可用于栽培種。
        值得注意的是:如果培養(yǎng)液變混,有兩種可能性,一是細菌污染應予以淘汰;二是由于菌絲生長過分粘稠所致。若難以判斷,可進行鏡檢。
        栽培流程
        優(yōu)選品種→制備培養(yǎng)基→蛹蟲草母種→二級菌種(藥瓶)→栽培蛹蟲草菌種→控制環(huán)境溫度與濕度→采收。
        區(qū)別
        人工養(yǎng)殖蛹蟲草與野生冬蟲夏草
        (1)形狀不同。天然蟲草是冬蟲夏草的蟲體或蛹體與蟲草菌的子實體(草的部分)合二為一體的整體,而蟲草花僅僅是北冬蟲夏草的子實體,在外觀上與天然冬蟲夏草有很大區(qū)別,但是還是有不少商人打著蛹蟲草的名義去賣蟲草花,其營養(yǎng)價值和一般大型真菌(如蘑菇,金針菇等)沒有太大的差別。真正的蛹蟲草是含有蟲體的,沒有蟲體的就是蟲草花。
        (2)營養(yǎng)載體不同。天然冬蟲夏草以自然蟲體或蛹體營養(yǎng)為基礎(chǔ),人工培植的北冬蟲夏草有多種培養(yǎng)基為基礎(chǔ)。營養(yǎng)載體不同影響蟲草菌的最終物質(zhì)的形成,北冬蟲夏草的人工培育,主要有兩類,一類是小麥、大米等谷類,二是跟野生蛹蟲草一樣,采用蛹體為基礎(chǔ),雖然它們是一樣的菌種,但最終在有效成分的含量上相差很大,蛹體是遠大于小麥、大米等,因此在價格上也有較大的差別。
        (3)生長環(huán)境不同。天然蟲草菌生長在自然環(huán)境中,這種自然環(huán)境是特定的,不是隨心所欲的。人工培植的蛹蟲草生長在人為的環(huán)境中,這種人為環(huán)境是根據(jù)蟲草生長的特定自然環(huán)境而設(shè)定,不過比自然環(huán)境更優(yōu)裕,從而使蟲草菌生長得更好、產(chǎn)量更高。
        (4)生產(chǎn)周期不同。由于受惡劣自然環(huán)境影響,天然冬蟲夏草在自然環(huán)境中生長周期為2-3年,主要是寄生體(蟲體)世代繁殖生育期較長以及蟲草菌受惡劣自然環(huán)境影響生長緩慢。人工培植的蛹蟲草菌在優(yōu)裕的生長環(huán)境中生產(chǎn),即人工控制最適宜生長條件以及在穩(wěn)定的生長環(huán)境中不受自然環(huán)境的影響,2個月內(nèi)就可以生產(chǎn)一批,大大提高了生產(chǎn)效率。
        (5)對環(huán)境影響不同。天然冬蟲夏草菌在自然環(huán)境中生長非常緩慢,跟不上市場與人們需求的需要。人們大量采挖天然冬蟲夏草,破壞了自然植被,也破壞了自然環(huán)境和資源。人工培植的蛹蟲草,在室內(nèi)進行生產(chǎn),沒有任何破壞自然植被、自然環(huán)境和資源的行為,而且在生產(chǎn)過程中沒有任何產(chǎn)物會污染環(huán)境。
        (6)人工培植的蛹蟲草比天然生長的冬蟲夏草有效成分更高。野生蟲草和人工蟲草在化學成分上是完全一致的,只是含量上有所差異。人工培植的蛹蟲草大多超過天然生長的冬蟲夏草。經(jīng)科學實驗分析證明,冬蟲夏草對人體健康的意義是其含有特有的藥用和保健作用的物質(zhì):蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖和豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素、維生素等。經(jīng)中國科學院理化分析測試實驗室化驗報道,具有蟲草代表性的4種主要藥理成分:蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖和SOD酶,人工蛹蟲草與野生冬蟲夏草相比,除了蟲草酸略低于野生蟲草外,其余均明顯高于野生蟲草。蟲草多糖高2倍,SOD酶高5倍,蟲草素高達89倍。尤其在眾多蟲草屬中,能產(chǎn)生最具特有代表性成分的蟲草素,只有人工蛹蟲草是能產(chǎn)生大量蟲草素的品種。人工蛹蟲草里蟲草素的含量大概是野生蟲草的10倍左右。
        蟲草中腺苷成分含量不能代表蟲草特有的藥用和保健價值,其原因是腺苷在香菇、蘑菇等幾十類真菌植物中都有存在。因此,把腺苷作為質(zhì)量指標是“貶低”了蟲草的特有價值,不能體現(xiàn)蟲草防病治病的特有奧秘。
        活性成分
        蟲草素等核苷類成分
        核苷類物質(zhì)為蟲草的主要活性成分之一,具有廣泛的生理功能。目前蛹蟲草核苷包括蟲草素、腺苷、腺嘌呤、尿嘧啶、尿苷、鳥嘌呤、次黃嘌呤核苷和胸腺嘧啶等。蟲草素又稱蟲草菌素或 3'- 脫氧腺苷 ( Cordycepin 或 3'- Deoxyadenosine) ,具有抑菌、抗病毒等生物活性,表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老、擴張支氣管、顯著增強腎上腺素等藥理作用功能 。蛹蟲草發(fā)酵菌絲體蟲草素的含量遠遠高于冬蟲夏草。蟲草素價格非常昂貴,能以腺苷、3' -O - 對硝基苯磺酰基腺苷等為原料進行化學合成 。 
        蟲草甾醇和糖醇類成分
        蟲草酸,為蟲草類真菌中的主要有效成分之一,具有利尿脫水、提高血漿滲透壓、鎮(zhèn)喘祛痰、抗自由基等藥理作用。蛹蟲草的蟲草酸含量目前一般使用用高碘酸鈉法進行比色測定 。不同碳氮源培養(yǎng)液對蛹蟲草蟲草酸含量的影響較大,蟲草酸含量以麥米蛹配方最高,每 1mL 培養(yǎng)液蟲草酸含量最高達 4. 94 mg,最低 0. 09 mg。
        麥角甾醇是真菌的特征醇,在蛹蟲草中的含量相對恒定,在一定程度上能反映藥材的質(zhì)量,可作為人工蛹蟲草子實體質(zhì)控指標之一。麥角甾醇具有抗癌、抗病毒、防 心 率 不 齊、減 毒 等 功 能。HPLC 法可測定蛹蟲草麥角甾醇的含量,蛹蟲草中麥角 甾 醇 的 含 量 平 均 為 0. 687%。不同產(chǎn)地和來源的人工蛹蟲草子實體中游離麥角甾醇的含量存在一定的差異,在 0. 39% -0. 82% 之間 。
        蟲草多糖
        現(xiàn)代醫(yī)學證明多糖具有抗腫瘤作用,同時具有抗衰老、抗氧化、抗凝血、降血糖、降血脂等
        作用,能提高免疫力,改善肝功能,延緩衰老等。蛹蟲草多糖組成的具體基本單位及結(jié)構(gòu)對深入了解蟲草多糖有重要意義。利用高效陰離子交換 - 脈沖安培檢測色譜法分別對P50、P70 - 1、P70-2、CBP-1、CBP-2 和 CBP-3 等 6 種精多糖的單糖組成成分進行了測定,結(jié)果除 CBP- 3 為葡聚糖外,其他 5 個多糖均為由 D- 甘露糖、D-半乳糖和 D -葡萄糖組成的雜多糖。
        蟲草多肽和無機元素成分
        蟲草含豐富的蛋白質(zhì)和氨基酸。很多具有生物活性的蛋白質(zhì)可以在實驗動物或人體中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,分離純化蟲草中的活性蛋白質(zhì)成分,以期找到一些新的具有臨床應用價值的蛋白質(zhì)或多 肽,已成為研究的一個重要方向。蛹蟲草的多肽 cordycepeptide A 及冬蟲夏草的一些多肽都表現(xiàn)出抗癌和免疫增強作用。具有重要功效的多肽不斷被發(fā)現(xiàn),例如蛹蟲草多肽 Cordymin 具有抗真菌作用 ,而蛹蟲草蛋白 CMP 具有抗真菌和抗癌作用 。蟲草微量元素研究報道很多,一般認為蟲草中含有豐富的微量元素,已檢出 30 多種元素,人體必需元素含量高。硒為微量元素中的抗癌之王,對砷、汞、鎘等重金屬有解毒作用,蛹蟲草中硒的含量十分豐富含硒量達到 92. 3 mg /kg 。
        凝集素
        凝集素能夠促進血細胞凝集和復合糖沉淀,被用 于 復 合 糖 的 檢 測 定 位 和分離研究。SDS -PAGE 電泳表明蛹蟲草凝集素的分子量大小為31. 0 kDa,在凝膠層析柱 Superdex - 200 HR 的峰值是 31. 4 kDa。蛹蟲草凝集素的凝血活性能被唾液糖蛋白類所抑制,但單糖和二糖、無唾液酸糖蛋白和乙酰醣蛋白卻沒有抑制作用。Wong 等 獲得蛹蟲草分子量大小為 30 kDa 的凝集素,這一凝集素在低于 60℃ 時具有穩(wěn)定的凝血作用。
        纖維蛋白溶解酶
        微生物的纖維蛋白溶解酶安全性好,生產(chǎn)成本較低,且可經(jīng)過胃腸道吸收,有望開發(fā)成預防或治療心血管疾病的新一代口服溶栓藥物。從蛹蟲草中通過 SDS - PAGE 電泳、纖維蛋白酶譜和凝膠過濾層析法檢純化的蛋白,其分子量為 52. 0 kDa,蛋白 N 末端的前 19 個氨基酸為 ALTTQSNVTHGLATISLRQ,與金龜子綠僵菌metarhizium anisopliae 的類枯草桿菌蛋白酶 PR1J 相似。這個纖維蛋白溶解酶的最佳酶活 pH 值和溫度分別為7. 4 和37℃ 。而另一報道獲得的纖維蛋白溶解酶分子量為 27. 3 kDa,最佳酶活 pH 值和溫度分別為 6. 0 和 25℃。Mg和Fe促進酶活,EDTA 和 Cu抑制酶活。
        超氧化歧化酶
        超氧化歧化酶的存在與生物體抗衰老、抗腫瘤、營養(yǎng)狀況、免疫性疾病、炎癥及輻射防護有關(guān)。超氧化歧化酶是蛹蟲草的活性成分之一,獲得的 超 氧 化 歧 化 酶 ( cm - SOD) 的 分 子 量 為15. 7 kDa,且含有銅和鋅元素; 純化后的蛹蟲草超氧化物歧化酶對熱比較穩(wěn)定,最適 pH 為 7. 8,在pH 值為 7 ~ 8 范圍內(nèi) SOD 的酶活性比較穩(wěn)定,且活力最大 。
        類胰島素蛋白
        純化的類胰島素蛋白 P- 1 - 1 通 過 SDS -PAGE 電泳檢測為 23. 4 kDa 的單一條帶,酶活性的最佳 pH 值范圍是 8. 5- 12. 0。這個蛋白能被亮肽素和氟代磷酸二異丙酯強烈抑制,也能被 a-對甲苯磺酰- L - 賴氨酸氯甲基酮鹽 ( TLCK) 、苯甲基磺酰氟化物 ( PMSF) 和糜蛋白酶抑制劑抑制。
        黃酮類物質(zhì)
        黃酮類化合物在自然界中分布廣泛,具有抗氧化、抗癌、抑制脂肪氧化酶、防治心腦血管疾病等方面的功效 。利用乙醇回流法提取蛹蟲草黃酮類化合物的最佳條件業(yè)已建立 。
        胡蘿卜素
        通過丙酮抽提和硅膠柱層析純化,獲得蛹蟲草類胡蘿卜素的 3 個光譜吸收峰分別為 416 nm、439 nm 和 468 nm,該類胡蘿卜素在蛹蟲草中隨時間變化但有一個產(chǎn)量的高峰期,其最高產(chǎn)量可達472. 3 μg /g 。蛹蟲草在光照條件下培養(yǎng),其菌落呈橙黃色,菌絲體中類胡蘿卜素含高量 。
        藥理作用
        蟲草多糖和SOD等多種生物活性物質(zhì)的藥用價值最為顯著。蟲草酸(甘露醇)可以顯著地降低顱壓,促進機體新陳代謝,因而使腦溢血和腦血栓病癥得到緩解。蟲草素是一種具有抗菌活性的核苷類物質(zhì),對核多聚腺苷酸聚合酶有很強的抑制作用。在DNA轉(zhuǎn)錄mRNA過程中使mRNA成熟障礙,抑制癌細胞的生長。并有降血糖的作用。蟲草多糖是一種高度分枝的半乳甘露聚糖,它能促進淋巴細胞轉(zhuǎn)化,提高血清IgG的抗體含量和機體的免疫功能,增強機體自身抗癌抑癌的能力。SOD(超氧化物歧化酶)可以消除機體內(nèi)超氧自由基,具有抗衰老、抗癌抑癌的作用。此外,蛹蟲草還含有豐富的硒(Se),這種微量元素已被大家公認是人體必需的微量元素,是谷胱甘肽過氧化酶的活性中心,以硒半胱氨酸的形式連接在酶蛋白的肽鏈上,保護細胞膜的穩(wěn)定性的正常的通透性,并刺激免疫球蛋白和抗體的產(chǎn)生,增強機體免疫和抗氧化能力。同時,大量的科學實踐證明硒可以明顯地抑制癌細胞的生長。
        蟲草素(3′-脫氧腺苷):抗病毒、抗菌、明顯抑制腫瘤生長、干擾人體RNA 及DNA合成。
        蟲草酸(D-甘露醇):預防治療腦血栓、腦溢血、腎功能衰竭,利尿。
        腺苷:抗病毒、抗菌,預防治療腦血栓、腦溢血 ,抑制血小板積聚防止血栓形成,消除面斑,抗衰防皺。
        蟲草多糖:提高免疫力,延緩衰老,扶正固本,保護心臟、肝臟,抗痙。
        麥角甾醇:抗癌、防衰、減毒。
        超氧化物歧化酶(SOD):抑制或消除催人衰老的超氧自由基形成及抗癌、防衰、減毒。
        硒(Se):為國際醫(yī)學界公認的抗癌元素,也是重要的抗氧化劑,能增強人體免疫力。
        菌種分離
        (1)選革選擇生長正常、健壯、無病蟲害的新鮮蛹蟲草做分離材料。用野生早期生長(8月底以前出土的)蛹蟲草分離得到的蛹蟲草菌種具有明顯早熟性(即早出草)。菌種分離可采用泡子分離或組織分離等方法,生產(chǎn)上常用組織分離獲得純菌種或進行菌種復壯。 
        (2)消毒將鮮蛹蟲草用清水洗去外表泥土,再用0.1%升汞水溶液消毒1-3分鐘,用無菌水沖洗數(shù)次,然后再用75%酒精浸泡3-5分鐘,用無菌水洗凈后進行分離。
        (3)分離先用解剖刀切去蟲體外部,避開腸道,然后切取內(nèi)部白色組織塊或子座內(nèi)的組織塊,接種到斜面母種培養(yǎng)基上。以蛹蟲草子實體有龜背狀花紋的頂端組織獲得菌種種性最好。
        (4)選擇抑菌培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基最好采用加有50毫克/升鏈霉素的加富培養(yǎng)基。如采用其他培養(yǎng)基進行分離,在培養(yǎng)基中加入一定量的抑菌劑會提高分離效果。常用抑菌劑使用量和加入方法如下:鏈霉素 30-50毫克/升,滅菌后冷卻至 45℃時加入;金霉素 20-30毫克/升,滅菌后冷卻至 45℃時加入;青霉素 20毫克/升,滅菌后冷卻至 45℃時加入;牛膽汁 5克/升,配制時加入;孟加拉紅 35毫克/升,培養(yǎng)基煮沸時加入。
        (5)培養(yǎng)分離接種后,在 20℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 10天左右,挑選性狀良好的母種作為菌種。
        (6)鑒定優(yōu)良菌種標準是:菌絲白色,粗壯濃密,呈匍匐狀緊貼培養(yǎng)基生長,邊緣整齊,無明顯絨毛狀白色氣生菌絲,后期分泌黃色色素,菌絲見光后變?yōu)殚冱S色。將分離菌種進行擴大培養(yǎng)后,接種在米飯培養(yǎng)基上進行出草和鑒定。于18℃-20℃溫度下培養(yǎng)20-30天,如果無污染則繼續(xù)培養(yǎng),l個月后即可形成橙紅色子實體。經(jīng)鑒定種性,選擇性狀優(yōu)良菌種用于生產(chǎn)。
        培養(yǎng)基
        以大米、玉米等作主料,另添加10%-25%的蠶蛹粉或奶粉媽提高蛹蟲草子實體的品質(zhì)。將培養(yǎng)料與營養(yǎng)液以1:1比例拌勻,pH值掌握在5.5-7.0。按常規(guī)裝瓶、滅菌、接種。
        菌絲體培養(yǎng)
        接種后的料瓶,應置于清潔、避光的環(huán)境中培養(yǎng),保護空氣濕度60%。初始階段,為減少雜菌污染,室內(nèi)溫室宜保持在15℃-18℃之間,待料面布滿蟲草菌絲后,將溫度提到20℃-23℃,持續(xù)15d左右,菌絲即可吃透培養(yǎng)料,完成營養(yǎng)生長。
        培植技術(shù)
        子實體培養(yǎng)
        菌絲體成熟后,由白色逐漸轉(zhuǎn)為桔黃色,此時,室內(nèi)應增加光照白,白天利用自然散射光,保持200勒克斯,晚間可利用日光燈作光源,每天應不少于10h光照,以促使菌絲體轉(zhuǎn)色和刺激原基形成。待料面突起,并形成小米粒狀原基時,要適當通風,補充新鮮空氣,保護室內(nèi)溫度18℃-22℃,并提高空氣相對溫度至80%-85%。如濕度太大,易使培養(yǎng)基提早失水而影響產(chǎn)量。蛹蟲草有較強的趨光性,因此在子實體形成后,應根據(jù)情況適當調(diào)整培養(yǎng)瓶與光源的相對方向,或調(diào)整室內(nèi)光源方向,以保證子實體的正常生長形態(tài),從而提高產(chǎn)量,形成橘黃色或橘紅色的頂部略膨大的呈棒狀的子座(子實體)。待子實體不再生長,其頂端出現(xiàn)許多小刺時,表明已成熟。采收時,用無菌鑷子鉗出子實體,然后再加少許營養(yǎng)液,重新包扎好瓶口,繼續(xù)培養(yǎng),20d左右,又可長出第二批子座。采收下的子實體晾干或低溫烘干后出售。暫不出售,應密封好置低溫干燥處貯存。
        液體培養(yǎng)
        天然蛹蟲草資源稀少,人工固體栽培周期長,也不易控制條件。通過液體深層培養(yǎng)法獲得蟲草菌絲體絲體的化學組成與從天然采集的蟲草的化學組成接近,而且可以從發(fā)酵液中得到人們需要的物質(zhì),還能大大縮短生產(chǎn)周期。
        蟲草菌絲的最適生長溫度為20~25°C。在進行菌絲發(fā)酵時碳源以蛋白胨為最優(yōu),采用1∶2或1∶3的碳氮比較為合適。
        發(fā)酵最佳培養(yǎng)基組成是:5%大米粉、1.5%豆餅粉、1.5%麥芽粉、0.1%KH2PO4,0.05%MgSO4·7H2O。
        影響蛹蟲草菌胞外多糖產(chǎn)量的實驗因子顯著性大小的排列順序為:甜菜糖>;酵母浸出粉>KNO3>MgSO4·7H2O>FeSO4>K2HPO4。胞外多糖最佳發(fā)酵工藝參數(shù):初始pH值為7,500ml三角瓶中培養(yǎng)基裝液量為100ml,接種量6%,溫度28°C。周期為96h。
        培養(yǎng)基配方為:玉米粉4%,黃豆粉0.6%,酵母粉0.3%,K2HPO40.05%,MgSO40.05%,接種量3%,pH5.5。認為碳源因子對胞外多糖的產(chǎn)生影響顯著。
        蛹蟲草發(fā)酵的適宜培養(yǎng)基組成為:蔗糖5.0%,玉米漿3.0%,酵母膏0.5%,MgSO4·7H2O0.05%,KH2PO40.05%,認為蔗糖為碳源最好,以酵母膏為氮源,菌體產(chǎn)量最高。
        蛹蟲草菌絲的生長可以利用多種碳源和氮源,在以紅糖碳源、奶粉為氮源的液體培養(yǎng)基中生長最佳,且碳源/氮源合適的比例為2.0~2.5/1.0,適宜PH為5.0~6.5。
        培養(yǎng)基成分確定為蛋白胨1.5%,MgSO40.05%,KH2PO40.15%,VB15mg/L,2,4D2mg/L。在相同條件下,優(yōu)化培養(yǎng)基比原來培養(yǎng)基的發(fā)酵得率提高了4.5%,研究初步得到蛹蟲草液體培養(yǎng)條件和生長動力學,為工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論依據(jù)。
        培養(yǎng)基配比可將該菌株的蟲草素含量提高到1.21%,比用Czapek培養(yǎng)基提高8.1倍。柴建萍等通過實驗得出玉米粉為最優(yōu)碳源,蠶蛹粉為最優(yōu)氮源,MgSO4為最優(yōu)無機鹽。液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基配方為:玉米粉(20g/1000ml),蠶蛹粉(5g/1000ml),硫酸鎂(0.5g/1000ml)。 

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