ε-聚賴氨酸鹽酸鹽

食品添加劑ε-聚賴氨酸鹽酸鹽從淀粉酶產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces. diastatochromogenes)受控發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)離子交換樹脂吸附、解吸、提純而來(lái)，可作為防腐劑用于水果、蔬菜、豆類、食用菌、大米及制品、小麥粉及其制品、雜糧制品、肉及肉制品、調(diào)味品、飲料類。國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委于2014年4月3日2014年第5號(hào)公告《關(guān)于批準(zhǔn)ε-聚賴氨酸等4種食品添加劑新品種等的公告》批準(zhǔn)ε-聚賴氨酸為食品添加劑新品種。

ε-聚賴氨酸鹽酸鹽

ε-poly-L-lysine?HCl

防腐劑

從淀粉酶產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces. diastatochromogenes)受控發(fā)酵培養(yǎng)液經(jīng)離子交換樹脂吸附、解吸、提純的食品添加劑ε-聚賴氨酸鹽酸鹽。

感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。

表1 感官要求

理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。

表2 理化指標(biāo)

試驗(yàn)方法規(guī)定的一些試驗(yàn)過(guò)程可能導(dǎo)致危險(xiǎn)情況。操作者應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩头雷o(hù)措施。

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均指分析純?cè)噭┖虶B/T 6682中規(guī)定的三級(jí)水。試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，在沒(méi)有注明其他要求時(shí)，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的規(guī)定制備。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。

A.3.1.1 堿性硝酸鉍溶液:堿性硝酸鉍0.85 g加乙酸10 mL及水40 mL溶解。

A.3.1.2 碘化鉀溶液:碘化鉀8 g加水20 mL溶解。

A.3.1.3 Dragendorf試液:堿性硝酸鉍溶液5 mL、碘化鉀溶液5 mL、乙酸20 mL和水100 mL混合而成。現(xiàn)用現(xiàn)配。

A.3.1.4 pH 6.8的0.1 mol/L磷酸緩沖溶液。

A.3.1.5 甲基橙試液:0.1 mmol/L。

A.3.1.6 正丁醇/水/冰乙酸溶液:(4:2:1)。

A.3.1.7 茚三酮的丙酮溶液:1→50。

A.3.2.1 0.1%試樣液1 mL加Dragendorf試液1 mL，應(yīng)產(chǎn)生紅褐色沉淀。

A.3.2.2取試樣0.1 g溶于pH6.8的0.1 mol/L磷酸緩沖溶液100 mL中，取試樣溶液1 mL，加甲基橙試液1 mL，應(yīng)產(chǎn)生紅褐色沉淀。

A.3.2.3參照GB/T5009.124方法將試樣水解成單一氨基酸，制成含本品約1 mg/mL的近中性水溶液，作為試樣溶液;精密稱取賴氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)樣品適量，加水稀釋成1 mg/mL的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液;另取試樣適量，制成含試樣約1 mg/mL的水溶液，作為對(duì)照液;另取賴氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)樣品與精氨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品各適量，置于同一量瓶中，用水溶解并稀釋成0.4 mg/mL的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》附錄V B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇/水/冰乙酸溶液為展開劑，展開液由原始線上升高于10 cm處時(shí)，晾干，90 ℃干燥10 min，噴以茚三酮的丙酮溶液，90℃加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn)，立即檢視。標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)顯示一個(gè)清晰斑點(diǎn);系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)溶液應(yīng)顯示兩個(gè)完全分離的斑點(diǎn)，且其中一個(gè)斑點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)溶液斑點(diǎn)色澤相似，Rf值相等;試樣溶液所得斑點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)溶液所示斑點(diǎn)，色澤相似，Rf值相等。對(duì)照液應(yīng)在原點(diǎn)處顯示一個(gè)清晰斑點(diǎn)，沒(méi)有其它斑點(diǎn)出現(xiàn)。

利用高效液相色譜測(cè)定ε-聚賴氨酸鹽酸鹽的含量。

A.4.2.1 磷酸氫二鉀。

A.4.2.2 硫酸鈉。

A.4.2.3磷酸。

A.4.2.4乙腈。

高效液相色譜儀:配有紫外檢測(cè)器，或其他等效的檢測(cè)器。

A.4.4.1 檢測(cè)波長(zhǎng):215 nm;

A.4.4.2 色譜柱:C18色譜柱，柱為4.6 mm×250 mm?；蚱渌韧蛛x效果的色譜柱和色譜條件。

A.4.4.3 流速:0.4 mL/min;

A.4.4.4 定量進(jìn)樣器100 μL。

A.4.5.1 流動(dòng)相的制備

將1.7 g的磷酸氫二鉀和1.42 g的硫酸鈉溶于800 mL的水中，用磷酸調(diào)pH至3.4后，用水定溶至1000 mL，取此溶液920 mL加入80 mL乙腈，混勻。用0.45 μm的膜過(guò)濾器過(guò)濾。

A.4.5.2 標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備

精確稱量約20.00 mg ε-聚賴氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)樣品，加入到25 mL的容量瓶中，加流動(dòng)相到刻度下1 cm處超聲10 min，待冷至室溫用流動(dòng)相定容至刻度混合均勻。將此溶液用0.45 μm的膜過(guò)濾器過(guò)濾，待用。

A.4.5.3 試樣溶液的制備

精確稱量約20.00 mg試樣，加入到25 mL的容量瓶中，加流動(dòng)相到刻度下1 cm處超聲10 min，待冷至室溫用流動(dòng)相定容至刻度混合均勻。將此溶液用0.45 μm的膜過(guò)濾器過(guò)濾，待用。

A.4.5.4測(cè)定

分別向液相色譜儀注入標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和試樣溶液，記錄主峰的峰面積，進(jìn)樣量為20 μL。

ε-聚賴氨酸鹽酸鹽含量(以干品計(jì))的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1，按公式(A.1)計(jì)算:

w1 = [(Ws × Ps / Wu) (Ru / Rs)×100 %]÷(1-w2)………………(A.1)

式中:Ws--制備標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液所用的ε-聚賴氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)量(mg);

Ps--制備標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液所用的ε-聚賴氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)樣品含量(%);

Wu--試樣溶液中試樣的質(zhì)量(mg);

Rs--標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液中主峰面積的響應(yīng)值;

Ru--試樣溶液中主峰面積的響應(yīng)值;

w2--A.5中測(cè)得的干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

注:系統(tǒng)適用性為重復(fù)注入標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液三次，所得響應(yīng)面積的相對(duì)平均偏差小于1.0%。

按GB 5009.3中的第一法，直接干燥法進(jìn)行測(cè)定。